Als Biome werden die verschiedenen Gebiete der Don't Starve-Welt bezeichnet. Sie unterscheiden sich in Terrain, Flora, Fauna, Größe, zu findenden Ressourcen und in ihrem Schwierigkeitsgrad. Das Spiel generiert Biome beim Erstellen einer neuen Welt zufällig, ohne dass sie ihre Besonderheiten verlieren. Die Welt gleicht am Ende einem Puzzle. Meistens hängen verschiedene Biome zusammen und bilden so einen großen Koninent, manchmal bilden einzelne Biome oder Gruppen von Biomen aber auch Inseln, die nicht über einen Landweg mit dem Hauptkontinent verbunden sind. Diese sind dann, wenn überhaupt, nur durch Wurmlöcher zu erreichen.
Folgende Tabelle zeigt alle verfügbare Biome:
  Strand
|  Schachbrett |  Korallenriff
|
  Birkenwald
|  Wald | |
 Weideland |  Friedhof |  Dschungel
|
 Mangrovenwald
|  Magmafeld
|  Sumpf |
 Wiese
|  Mosaik |  Ozean |
 Ozean (Mittel & Tief)
|  Ozean (Seicht)
|  Savanne |
 Moor
|  Steinwüste |
 Höhlensumpf |  Pilzwald |  Steinebene |
 Tropfsteinhöhle |  Versunkener Wald |
 Labyrinth |  Kaserne |  Heiligtum |
 Dorf |  Wildnis |   Atrium
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| Biome | |
| Oberwelt | Schachbrett • Weideland • Friedhof • Wald • Sumpf • Mosaik • Steinwüste • Savanne (Wüste • Birkenwald  ) (Strand • Korallenriff • Dschungel • Magmafeld • Mangrovenwald • Wiese • Ozean • Moor  ) |
| Höhlen | Pilzwald • Steinebene • Tropfsteinhöhle • Versunkener Wald • Höhlensumpf |
| Ruinen | Labyrinth • Kaserne • Heiligtum • Dorf • Wildnis (Atrium  ) |
| Sonstiges | Brücke • Karte • Straße (Pfad) • Boden • Abyss |
